【摘 要】
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以重组质粒pET-fliC和PUC57-M2e2为模板，通过重叠PCR将M2e2基因插入fliC的高变区域，构建嵌合鞭毛基因片段fliC/M2e2。将fliC/M2e2片段插入原核表达载体pET30a+，获得重组质粒
【机 构】
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扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州 225009
【出 处】
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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛
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以重组质粒pET-fliC和PUC57-M2e2为模板，通过重叠PCR将M2e2基因插入fliC的高变区域，构建嵌合鞭毛基因片段fliC/M2e2。将fliC/M2e2片段插入原核表达载体pET30a+，获得重组质粒pET-fliC/M2e2。应用P22噬菌体转导技术，将fliC/M2e2基因导入都柏林沙门菌SL5928的基因组中，经PCR、动力学测定、透射电镜观察、Western blot分析鉴定，将阳性转导菌命名为SL5928(fliC/M2e2)。提取重组菌鞭毛蛋白fliC/M2e2作用HEK293-mTLR5细胞，能刺激细胞分泌IL-8。fliC/M2e2以50μg/只的剂量通过皮下注射途径免疫C3H/HeJ小鼠。结果显示，第二次免疫后第14天，fliC/M2e2鞭毛蛋白免疫组的血清抗体效价与对照组之间呈现显著性差异(P<0.05)。ELISPOT结果表明，在脾脏细胞中，fliC/M2e2鞭毛蛋白免疫组检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞，且免疫应答以Th1型为主。说明本研究所构建的fliC/M2e2嵌合基因能够在沙门菌中表达，重组嵌合鞭毛蛋白fliC/M2e2能激发机体针对M2e表位的体液免疫应答和Th1型细胞免疫应答。
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