基于HPLC-DAD测定芦丁的纯度和不确定性分析

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高效液相分析广泛用于样品的纯度分析,但仍存在固定相,流动相和波长等影响测量结果的不确定性因素。本文以芦丁为研究对象,以样品中主成分和3种后杂的分离效果为评价指标,对流动相和波长进行优化,并利用光谱归一化法,吸收光谱差值法和双波长法对主峰纯度进行分析。结果显示乙腈-水为流动相有利于芦丁与后杂的分离。在芦丁最佳吸收波长(入max=256 nm)下的峰面积比(RPA)为96.00%,而在其它5种波长(220,260,300,340,380 nm)下的RPA的均值为(96.02±0.27)%。光谱归一化的不重叠和双波长方法都说明主峰不纯,且吸收光谱差值法更加进一步说明了主峰在12.17 min后开始出现杂质(色谱峰起始和终止时间为:11.87 min,12.74 min)。本试验说明了利用HPLC测定样品纯度时由流动相和波长的选择所引起结果的不确定性,并在主峰为纯峰且样品符合公式:RPAsvg-RSD≤RPAλmax≤RPAavg+RSD(RSD≤1%)时,可以提高HPLC方法对样品纯度分析的结果合理性,使得结果更加接近于样品的真实纯度。
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