【摘 要】
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目的：构建基于Smad3的反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统，作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。 方法：分别以EGFP、d2EGFP为报告基因，neo为筛选基因，构建以4×成
【机 构】
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解放军成都军区昆明总医院骨科第三军医大学西南医院烧伤科创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 650032
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目的：构建基于Smad3的反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统，作为抗瘢痕增生药物高通量筛选体系。
方法：分别以EGFP、d2EGFP为报告基因，neo为筛选基因，构建以4×成纤维细胞α2Ⅰ型前胶原(COL1A2)基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基冈载体p4COL1A2-EGFP和p4COLIA2-d2EGFP，并将其稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)，获得Smad3反应性报告细胞株NIH3T3-d2EGFP和NIH3T3-EGFP。加入TGF-β1，比较不同时相点EGFP和d2EGFP的表达。应用Smad3“圈套”寡核苷酸(TFD)转染NIH3T3-d2EGFP，半小时后加入TGF-β1，观察TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP表达的作用。
结果：p4COL1A2-d2EGFP是较理想的Smad3反应性d2EGFP报告基因载体，Smad3 TFD对TGF-β1诱导调控d2EGFP的表达具有明显拮抗作用。
结论：Smad3反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测Smad3的活性变化。
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