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目的本报道拟制备近年发现的与移植物抗宿主反应(Graft-Versus-Host Disease,GVHD)密切相关的一段小肽多克隆抗体,利用目前兴起的毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法(CEIA-LIF)。方法建立该小肽的监测方案。方法(1)抗原及抗体制备:按兔体重称取一定量的合成肽溶于20?l水中,滴在约5mm2的醋酸纤维素膜上,待其自然干燥后,加生理盐水研磨成细颗粒状,最后按每次2.5ml用量制成悬液;动物免疫:按常规方法,在脊柱两侧皮下和腹股沟处多点注射,分三次免疫,第三次免疫后10天在耳缘静脉取血进行实验,并对血清中抗体用间接ELISA法进行效价和特异性分析。(2)LIF-CEIA检测游离肽抗原法:制备适当浓度的FITC标记小肽用于竞争,加入冻干处理后尿样本和兔血清,4℃反应过夜。然后压力进样后在含7mM硼砂,15mM磷酸钠,50mMSDS,pH9.1的分离缓冲液以20kV正向电压分离。结果间接ELISA法结果显示获得该肽的多克隆抗体的效价为103,且特异性较好,与正常人血清、尿液以及牛血清间没有交叉反应;电泳结果表明标记游离抗原出峰时间为5.93分钟,抗原-抗体复合物分离时间为6.47分钟,最低检出限为10ng/ml。讨论2004年Kaiser等在对异体干细胞移植患者不同阶段的尿液标本中发现由LVRYTKKVPOVSTPTL 16个氨基酸组成,分子量为1.83kd的小分子肽,它在95%的移植物抗宿主反应(Graft-Versus-Host Dis- ease,GVHD)患者尿中显著升高,且出现时间比临床症状提早5～15天;同时该小肽在健康人群、脐血干细胞移植正常患者中浓度很低,在败血症或发热患者中其水平小幅升高,但增高程度较GVHD患者还有十分明显差别。如果能建立该小肽的快速检测方案,无疑对临床诊断和鉴别诊断GVHD,及早采取抗GVHD治疗,提高移植成功率具有重要价值。因此本实验所获得的多克隆抗体和建立多肽的检测方法为今后该肽在病理条件下的生理意义和监测提供简便、快速的手段。