【摘 要】
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目的：分析联合应用不同浓度TGFβ1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化过程的影响,寻找最佳的促进BMP9成骨的TGFβ1剂量,为联合不同细胞因子促进组织工程骨再生寻找有效途径.方法：应用鼠间充质干细胞株C3H10T1/2,以重组腺病毒法将其导入BMP9,,在分别加入不同浓度TGFβ1蛋白处理,建立BMP9联合TGFβ1诱导间充质干细胞成骨分化模型.条件培养基法获取含活性良好的TGFβ1β蛋白上清液
【出 处】
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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会
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目的：分析联合应用不同浓度TGFβ1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化过程的影响,寻找最佳的促进BMP9成骨的TGFβ1剂量,为联合不同细胞因子促进组织工程骨再生寻找有效途径.方法：应用鼠间充质干细胞株C3H10T1/2,以重组腺病毒法将其导入BMP9,,在分别加入不同浓度TGFβ1蛋白处理,建立BMP9联合TGFβ1诱导间充质干细胞成骨分化模型.条件培养基法获取含活性良好的TGFβ1β蛋白上清液；改良SEAP化学发光法和组织化学染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达及活性；茜素红S染色检测钙盐沉积；实时荧光定量PCR和Westernblot法分别检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(COLI)、骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)的Mrna转录表达水平和蛋白表达水平改变；流式细胞仪检测细胞周期,台盼蓝拒染法技术活细胞检测细胞增殖.结果：低浓度TGFβ1与BMP9联合处理较BMP9单独处理能更早更多地提高ALP活性和引起钙盐沉积,持续处理17d后钙盐沉积结果不再显示明显差异,TGFβ1单独处理与对照组间无明显差异.随TGFβ1浓度增加,ALP活性和钙盐沉积效应受到抑制.低浓度TGFβ1与BMP9联合处理较BMP9单独处理使COLI、OPN、OCN的Mrna转录水平和蛋白表达水平明显增高,COLI增高变化发生较早和显著：TGFβ1达到高浓度出现基因转录和蛋白表达受到抑制,但COLI升高趋势仍能维持.BMP9促进细胞增殖,TGFβ1对该效应起抑制作用,细胞周期转化表现G0/G1期阻滞.结论：在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中,适量的TGFβ1联合应用具有促进作用；BMP9与TGFβ1在诱导成骨分化中可能存在协同作用.
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