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背景:猪瘟(classical swine fever,CSF)曾被称为猪霍乱(hog cholera,HC),俗称"烂肠瘟",是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。流行范围广,世界各地都有爆发,对世界养猪业的发展造成了巨大的影响,在中国被列为一类传染病,是国内猪病中危害最大的疾病之一。猪瘟病毒是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,其病毒粒子呈二十面体对称结构,直径约为40~70nm,髓芯直径约29~30nm,且在病毒颗粒表面有6~8rnm的纤突结构。CSFV与牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diseasevirus,BVDV)和羊边界病病毒(border disease virus.BDV)同属黄病毒科瘟病毒属,它们不仅在基因组、结构上有很高的相似性,而且在血清学诊断上不宜鉴别。IDEXX公司研制的猪瘟抗原检测试剂盒依然无法实现特异检测猪瘟病毒。目的:因此,制备更高特异性及灵敏度的猪瘟病毒的单克隆抗体用于猪瘟病毒的检测尤为重要。方法:本研究主要分为三个部分:首先,优化猪瘟病毒石门株在PK-15细胞中的增殖条件,以得到更高滴度的猪瘟病毒,并建立了稳定性较高的猪瘟病毒检测方法;然后,将在PK-15细胞上扩增的病毒经离心去除较大细胞碎片、100kD膜包进行超滤浓缩得到粗纯的猪瘟病毒并回收病毒浓缩液、再经琼脂糖凝胶分子筛Sepherose 4 Fast Flow(4FF-SEC)提纯等步骤纯化,得到较高纯度的猪瘟病毒作为免疫原免疫6—8周龄BALB/c小鼠;最后,选取免疫效价较高的免疫小鼠进行细胞融合,经筛选克隆后获得了特异识别猪瘟病毒石门株的单克隆抗体。结果:经优化,病毒在PK-15上高效率增殖的条件确定为:在细胞汇合度达60~70%时,1:10接毒,孵育60h,此时,病毒增殖滴度达到峰值。在病毒纯化方面,4FF-SEC提纯的病毒,较文献中报道的超速离心以及密度梯度离心纯化效率都有提高。用纯化的猪瘟病毒免疫的小鼠脾细胞与瘤细胞经细胞融合、多次亚克隆后获得了4株单克隆抗体。结论:经ELISA,IPMA,western blot等方法鉴定这些抗体均为针对猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体,并特异识别猪瘟病毒,不与牛病毒性腹泻病毒发生反应,为猪瘟病毒抗原检测技术奠定了基础。