《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》把口蹄疫列为优先防控和净化的疫病，把疫苗免疫作为最重要的技术支撑.然而其常规种毒制备的疫苗(1)效力不高(应答晚、持续期短)影响田间防控效果、(2)难以区分免疫与感染困扰疫病净化、(3)以强毒株为种毒存在安全隐患.由于该毒自然属性的限制，导致了常规疫苗技术不能很好地解决上述问题.为了解决上述问题，本项目结合应用口蹄疫疫苗种毒筛选和反向遗传操作等技术，对种毒进行改造：(1)降低和消除种毒致病性；(2)拓宽抗原谱、提高稳定性和抗原免疫原性；消除结构蛋白对宿主免疫的抑制，改善免疫应答；(3)开发缺失表位标识疫苗毒株，彻底解决难以区分疫苗免疫与野毒感染的技术难题.通过本项目的实施，从"种毒"这一源头克服常规疫苗种毒的技术缺陷，优化种毒的性状，显著提高免疫效力，并实现疫苗产业化，为国家口蹄疫防控和净化战略提供关键技术支撑.作者及其团队已成功建立了基于反向遗传操作技术的口蹄疫疫苗种毒改良筛选技术平台，并制备了新的种毒，显著提高抗原产量(1.8～3.0μ.g/mL提高至4.8～15.0μg/mL)和免疫保护力(含2.6μg抗原PD50由3.0～6.81提高至10.81～15.95)，获得新兽药证书2个(2013-23号和45号).前期基础研究也证实了S片段缺失可完全消除对猪的致病力、VP3结构蛋白抑制宿主免疫等.本项目结合前期研究基础，进行种毒的关键技术改造：(1)制备出对猪牛无致病性、不形成血毒症、不排毒，且在细胞上培养滴度高的毒株.(2)筛选广谱抗原的基础上，进行抗原结构的匹配性修饰，选择引入T细胞表位和钙化素信号肽，构建抗原谱广、免疫原性强、对热和酸稳定的重组疫苗毒株.(3)删除或突变结构蛋白的免疫抑制功能域，改善早期应答能力和免疫反应性，解决传统口蹄疫疫苗免疫应答慢的重大缺陷.(4)建立缺失表位的标记疫苗种毒和配套检测技术，彻底解决难以鉴别疫苗免疫和野毒感染的技术难题，为口蹄疫净化的国家战略提供技术支撑.