【摘 要】
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根结线虫(Meloidogyne spp.)是世界范围内严重危害农业生产的病原生物种类和各国的植物检疫对象,其中南方根结线虫(M.incognita)、花生根结线虫(M.arenaria)和爪哇根结线虫(M.javanica)因其广泛的分布性和多寄主性成为热带、亚热带地区最主要的种类,而3种根结线虫的种间的差异性较小,这导致很难对其进行准确鉴别.反转录-环介导等温扩增技术(Loop-mediate
【机 构】
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云南农业大学植物保护学院,昆明650201
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根结线虫(Meloidogyne spp.)是世界范围内严重危害农业生产的病原生物种类和各国的植物检疫对象,其中南方根结线虫(M.incognita)、花生根结线虫(M.arenaria)和爪哇根结线虫(M.javanica)因其广泛的分布性和多寄主性成为热带、亚热带地区最主要的种类,而3种根结线虫的种间的差异性较小,这导致很难对其进行准确鉴别.反转录-环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新的、特异性、方便快捷的核酸扩增技术,与传统的PCR技术相比,LAMP不需要热循环,实验结果肉眼即可观察,具有高效和特异性,目前在植物线虫的检测当中得到广泛的应用.本研究采用南方根结线虫的特异性引物(MiF、MiR)、爪哇根结线虫的特异性引物(MjF、MjR)和花生根结线虫的特异性引物(MaF、MaR)分别对所选择的根结线虫进行PCR扩增,将扩增产物纯化、回收并测序.根据测序结果,采用PrimerExplorerV4软件,分别设计3种根结线虫的LAMP特异性引物,用特异性LAMP引物检测3种根结线虫,均表现出特异性.在此基础上进一步优化了反应体系中的dNTPS、 Mg2*、甜菜碱和反应时间条件,建立了南方、花生和爪哇根结线虫的LAMP快速检测体系为：dNTPS浓度为1mmol/L,Mg2*的浓度为5mmol/L,不添加甜菜碱,反应时间为45min.建立的南方、花生、爪哇根结线虫LAMP快速分子检测方法能够直接从植物根结中准确检测出南方、花生、爪哇根结线虫,具有较高的实践应用价值.
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