论文部分内容阅读
在畜牧业集约化养殖模式中,仔猪早期断奶和孕猪限位栏使用,畜舍通风不良及有害气体的蓄积、动物分群、运输、预防接种等均给动物造成了严重的应激,容易诱发动物机体强烈的氧化应激反应。应激是典型的神经-内分泌调控行为。机体受到应激源刺激时,快速激活促肾上腺皮质激素释放因子信号系统:下丘脑-垂体-肾上腺皮质（HPA）轴及交感肾上腺髓质系统（SAS）。HPA轴的激活使得位于下丘脑的神经内分泌细胞释放促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）,刺激垂体释放促肾上腺素皮质激素,继而刺激肾上腺皮质释放糖皮质激素（GC）进入血液循环中。SAS通过释放去甲肾上腺素将交感神经信号传输到外周器官。本文主要对应激致生殖黏膜免疫和肠黏膜损伤的神经内分泌机制做一探讨。首先,制动应激致孕鼠妊娠失败的神经调控信号通路。制动应激处理孕鼠能引起明显的应激反应,并且诱导着床期和着床后期性器官指数降低以及胚胎数目减少。制动应激诱导子宫内膜发育异常,导致子宫内膜炎性细胞浸润、子宫腺腔弯曲且腺上皮细胞空泡化,子宫内膜和子宫腺面积比例减小;抑制子宫妊娠适应性重建和血管发育标志分子-MMP-9蛋白的表达,降低子宫组织中VEGF和CD34阳性细胞表达;降低子宫组织中MODPCNA/MODTUNEL比值,增加子宫组织中Caspase-3蛋白表达。制动应激导致子宫局部免疫失衡;抑制uNK细胞的表达,同时激活母胎界面的MC;降低T和B淋巴细胞的增殖活性及CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比例,从而扰乱子宫局部的免疫微环境,使得Th1/Th2平衡向Th1方向发展。制动应激加重子宫局部氧化应激,并且氧化应激抑制ESCs细胞增殖活性的降低。进一步发现β2-AR在制动应激致孕鼠早期胚胎丢失中起主导作用。制动应激促进NE分泌,与细胞膜上β2-AR结合,激活胞内cAMP及下游PKA信号,抑制ESCs细胞增殖,促进ESCs细胞凋亡。因此,制动应激干扰子宫内膜重建的信号通路是:激活孕鼠SAS,刺激皮质酮和去甲肾上腺素等应激激素分泌,经β2-AR介导,激活胞内cAMP以及下游PKA信号,直接激活或者间接通过诱导子宫局部的氧化应激产生ROS激活ERK1/2磷酸化,一方面直接激活NF-κB进入细胞核,与靶基因结合,产生炎性细胞因子IL-2,使子宫局部Th1/Th2平衡偏向于Th1炎性状态,诱导着床期子宫的局部免疫平衡紊乱;另一方面增加子宫组织Caspase-3的蛋白表达,诱导子宫内膜细胞凋亡,阻滞子宫内膜的妊娠适应性重建,导致子宫内膜容受性的降低,从而不利于胚胎的着床和发育。其次,断奶应激腹泻致仔鼠肠黏膜损伤的神经内分泌机制。断奶应激腹泻肠道中VIP,5-HT,NE具有明显的变化,VIP在断奶腹泻仔鼠中变化明显,而且VIP与5-HT有较高的相关性。5-HT水平的异常升高抑制肠上皮细胞和肠腺细胞的增殖活性、肠绒毛的生长和紧密连接蛋白的表达,促进肠细胞的凋亡与脱落,肠绒毛萎缩,肠隐窝干细胞标记基因的表达紊乱,进而破坏肠道机械屏障功能;体外实验证实高浓度5-HT（>25μM）可能通过刺激并结合细胞表面的5-HT3R,激活细胞内ERK途径,最终激活凋亡效应器的终端,引起cleaved caspase-3表达量增加,从而促进IEC-6上皮细胞系的凋亡;但是VIP呈剂量依赖式的促进IEC-6细胞的增殖,抑制IEC-6细胞的凋亡;VIP主要通过VPAC1而不是VPAC2促进IEC-6细胞增殖;因此腹泻时VIP的升高可能是机体的修复机制。同时5-HT通过升高CD3+CD4+T/CD3+CD8+T淋巴细胞比值、改变不同肠段淋巴细胞增殖活性及细胞因子在肠道的分布形式,打破肠道黏膜免疫平衡状态。