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测定5株临床分离的金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类药物MIC值,范围4~≥128μg/mL,结果显示,这5株菌皆为氟喹诺酮耐药株。通过思诺沙星人工多步诱导标准金黄色葡萄球菌28001产生MIC值为4~≥128μg/mL的耐药变异株。提取各细菌染色体DNA,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增,产物与pMD18-T载体连接,转化至JM109大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,测序。序列分析结果表明,各株菌均发生基因突变。突变位点grl4:Ser80(TCC)→Phe(TGC),Ser80(TCC)→Tyr(TAC),gyrA:Ser84(TCA)→Leu(TTA)、Ser84(TCA)→Mla(GCA)、Glu88(GAA)→Lys(AAA),其中两株临床分离菌株对氟喹诺酮类药物MIC值低(4~64μg/mL),均发生grlA单一点突变,其余3株临床分离菌株在gyrA移grlA上产生多突变位点,且对氟喹诺酮类药物MIC值较高(8~≥128μg/mL)。3株人工诱导菌株中,低水平(MIC≤16μg/mL)的耐药突变株只发生grlA Scr80(TCC)→Phe(TGC)或grlA,Ser80(TCC)→Tyr(TAC)点突变,高水平(MIC≥128μg/mL)的耐药需要grlA Ser80(TCC)→Phe(TGC)或gyrA Ser84(TCA)→Leu(TTA)等两个位点的突变。说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药,高水平的耐药需要多位点的突变。5株临床分离和3株人工诱导耐药菌株均发grlA Ser80→Tyr(Phe)点突变,提示环丙沙星,诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶Ⅳ。