【摘 要】
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病毒性出血性败血症(VHS)、传染性胰脏坏死症(IPN)、鱼传染性造血器官坏死症(IHN)是同被列为的二类传染病,这三种病毒病均是由RNA病毒引起的急性高度传染性疾病,可侵害多种海
【机 构】
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南京农业大学动物医学院,南京,卫岗,210095;连云港出入境检验检疫局,连云港市中山中路339号,222042南京农业大学动物医学院,南京,卫岗,210095连云港出入境检验检疫局,连云港市中山中路
【出 处】
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中国水产学会鱼病学专业委员会第六次会员代表大会暨国际学术讨论会
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病毒性出血性败血症(VHS)、传染性胰脏坏死症(IPN)、鱼传染性造血器官坏死症(IHN)是同被列为<中华人民共和国进境动物一、二类传染病、寄生虫病名录>的二类传染病,这三种病毒病均是由RNA病毒引起的急性高度传染性疾病,可侵害多种海水和淡水养殖鱼类,危害非常严重.本研究对三种病毒病的各种病毒建立了单管法RT-PCR,既一步法检测各种RNA病毒目的基因,在此基础上建立了三种病毒多重PCR检测方法.本研究设计合成3对引物,分别是:ipnf/ipnr扩增IPNV病毒VP2基因的206bp的RNA片段,最高检测灵敏度可达10-1.29(0.512)TCID50/50μl;ihnf/ihnr识别IHNV病毒N基因的371bp的RNA片段,最高检测灵敏度可达100.6(3.98)TCID50/50μl;vhsf/vhsr可以扩增VHSVG基因的625bp的RNA片段,最高检测灵敏度可达101.86(72.4)TCID50/50μl.用三对引物可同时特异性扩增IPNV、IHNV、VHSV三种病毒,彼此之间无干扰反应,最高灵敏度可达1TCID50/50μl、4TCID50/50μl、5TCID50/50μl.单管RT-PCR方法检测IPNV,IHNV和VHSV三种鱼病毒,检测过程约需4.5h,与常规的细胞培养抗体中和试验,或组织样品经细胞培养再分别单独进行逆转录后再扩增需时3-4周进行比较,要节省大量的时间、人力、试剂材料和费用.
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