【摘 要】
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本实验建立了鉴别猪伪狂犬病毒(PRV)强弱毒高效纳米PCR检测方法,并对相关条件进行优化,组装了试剂盒.根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB(431 bp)、gE(316 bp)
【机 构】
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中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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本实验建立了鉴别猪伪狂犬病毒(PRV)强弱毒高效纳米PCR检测方法,并对相关条件进行优化,组装了试剂盒.根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB(431 bp)、gE(316 bp)和gG(202 bp)3个基因,用于区分PRV强毒与基因缺失毒株,优化反应条件后建立了纳米PCR检测PRV强弱毒的方法并组装试剂盒,对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性及保存期评估试验,并对临床样品进行了检测.特异性试验表明本试剂盒对于PRV能够扩增出431(gB)、316(gE)和202 bp(gG)的目的片段,对于PRV-Bartha-K61能够扩增出431 bp和202 bp的目的片段,对于猪捷申病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及大肠杆菌等DNA或cDNA均未扩增出条带,敏感性试验表明本试剂盒的方法比常规PCR方法敏感100～1000倍,最低核酸拷贝数检出量可以达到101拷贝/μL数量级.试剂盒的批内、批间检测结果无明显差异,稳定性良好.-20℃至少可保存12个月.在对中国黑龙江、吉林等7个省份的临床送检的117份样品进行检测,检测结果显示PRV强毒阳性率为51％,阴性率为49％,未发现有弱毒感染.鉴别PRV强弱毒纳米PCR试剂盒的研制,对PRV感染的早期检测、野毒株和疫苗株的鉴别、疾病控制等都有重要意义,而且也可以用于其他动物PRV感染的检测和早期诊断.
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