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目的:探索大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的分离、培养、诱导分化及鉴定方法。
方法:冲洗大鼠骨髓腔,梯度密度离心法获得单个核细胞,内皮细胞培养液EGH-2MY培养,通过细胞形态,免疫组化和免疫荧光检测CD34、VEGFR-2、vWF,CDl33,摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-Lectin-UEA-1,超微结构及染色体核型分析进行鉴定。
结果:新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,大小不一,48h后部分细胞开始贴壁,呈梭形、纺锤形或不规则形,4~8d呈细胞集落或线状排列,9~11d接近融合,呈典型鹅卵石样外观。贴壁细胞CD34、CD31、VEGFR-2、vWF、CDl33均表达阳性并呈动态变化,能够摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-Lectin-UEA-1,透射电镜见特征性Weible-Palade小体,能稳定保持二倍体核型。
结论:本实验初步建立了一套大鼠骨髓血管内皮祖细胞分离、培养、诱导分化及鉴定方法体系。