鸡松果体中昼夜节律钟基因的节律变化

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光照对动物昼夜节律调控褪黑激素分泌发挥着关键作用。禽类松果体因其独立的生物钟系统可作为生物节律研究的模式器官。禽类生物节律是由正调控钟基因cBmal1/2,cClock和负调控钟基因cCrys,cPers形成的复杂的反馈环路通路调控。为探讨肉鸡松果体钟基因对褪黑激素的调控机制,本研究通过在LD(1ight:dark)(12:12)条件下培养鸡松果体原代细胞,用RT-PCR方法检测钟基因mRNA以及合成褪黑激素关键酶AANAT mRNA在24h的昼夜节律变化,并且通过Elisa方法检测24h内松果体细胞中褪黑激素含量的变化。结果显示:①cBmal1/2和cClock的mRNA水平在LD(12:12)条件下均表现为在主观白天持续上升,直至主观夜晚中期达到最高峰。值得注意的是cBmal2的节律会比cBmall的节律延迟4h左右。②cCry1 mRNA的水平变化在LD(12:12)条件下表现为主观白天保持增加,在后期达到高峰,而在主观黑夜降低,在夜晚后期显示表达的低谷。cCry2 mRNA的表达变化表现为分别在主观白天和主观夜晚的中期出现两个小高峰。cPer2和cPer3 mRNA水平表达均呈现为主观白天下降,在昼夜交替处出现表达的低谷,主观夜晚逐渐上升,在主观夜晚的后期或者是主观白天的早期出现表达的高峰。③cAanat mRNA的表达水平表现为在主观白天降低,在主观白天的后期出现低谷,之后逐渐上升,在主观夜晚的后期达到最高值。④如同cAanat mRNA的变化,鸡松果体细胞中褪黑激素的表达也呈现出在主观白天降低,在主观白天后期出现低谷之后逐渐上升直至在主观夜晚的后期达到表达的高峰。以上结果提示:禽类松果体具有独立于其他主钟的感光功能,可以接受外界的光信息,并将光信息传递到细胞内驱动昼夜节律的钟基因反馈环路的调控,从而调节褪黑激素的释放。而生物钟钟基因的调控模式主要表现为:正调控基因在主观夜晚表达量升高,从而促进合成褪黑激素关键酶AANAT的合成,进一步诱导褪黑激素和合成和释放。而负调控基因在主观白天升高,抑制AANAT的合成,从而导致褪黑激素在白天的释放降低。
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