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背景:慢性排斥反应及其所致的移植物血管病变是移植心脏失功的主要原因,目前分子机制尚有不明之处。高迁移率族蛋白1(HMGB1)作为一种炎性介质,促进急性排斥反应的作用与机制已得到阐述,但在心脏移植慢性排斥反应中的作用及潜在机制尚未见报道。目的 :探究HMGB1在小鼠心脏移植慢性排斥反应及移植物血管病变中的作用及细胞与分子机制。方法 :1.小鼠心脏移植慢性排斥反应模型制备:以C57BL/6小鼠为受体,B6.CH-2bm12Kh Eg小鼠为供体建立了MHC-II分子错配的小鼠心脏移植模型,可自发慢性排斥反应。2.HMGB1阻断抗体干预治疗。3.检测方法与指标:(1)免疫组化、免疫荧光检测移植物的细胞浸润及HMGB1、转化生长因子β(TGF-β)的表达;(2)H&E和EVG染色检测慢性排斥反应和心脏移植物血管病变;(3)RT-PCR、Western Blot检测HMGB1及TGF-β的表达;(4)ELISA检测血清、组织匀浆和细胞培养上清中相关细胞因子水平;(5)流式细胞术检测T细胞反应、调节性T细胞、同种抗体含量、巨噬细胞、树突状细胞(DC)成熟及其亚群;(6)单向混合细胞培养检测供者特异性同种T细胞应答。结果 :1.成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植慢性排斥反应模型。2.HMGB1和TGF-β伴随慢性排斥反应的发展而表达增多,HMGB1特异性中和性单克隆抗体处理受者,可显著改善心脏移植慢性排斥反应介导的血管病变及移植物纤维化。3.抗HMGB1单抗处理受者,对慢性排斥反应相关的细胞与分子的影响包括:(1)对固有免疫细胞的影响:阻断HMGB1治疗显著减低移植物和外周淋巴器官中巨噬细胞的比例及成熟DC的比例和数量,尤其是与炎症性DC(Inf-DC)享有类似表型的CD11b+Ly6Chigh成熟DCs亚群。体外实验表明在HMGB1或TGF-β1的单独刺激下,小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)表型成熟并向类似于Inf-DC亚群分化,同时HMGB1诱导成熟的DC亚群促使同种反应性T细胞增殖及Th1/Th17反应。(2)对T细胞的影响:阻断HMGB1治疗处理显著降低受者针对供者的特异性细胞免疫应答如Th1/Th17反应,升高调节性T细胞的比例。(3)对促炎因子的影响:阻断HMGB1治疗处理减少慢性排斥反应过程中心脏移植物内炎性细胞的浸润及炎性相关细胞因子的产生如TNF-α、IL-1β、TGF-β。(4)对促纤维化关键分子TGF-β的影响:阻断HMGB1治疗后TGF-β表达水平降低,体外实验证明HMGB1对TGF-β具有直接促进作用,可以诱导小鼠心脏单个核细胞直接分泌有活性的TGF-β。结论 :1.HMGB1参与了小鼠心脏移植慢性排斥反应和CAV的发展。其主要机制可能为:(1)促进心脏移植物浸润的和受者脾脏中的DC成熟,促进供者特异性的Th17及Th1应答;(2)促进炎症细胞分泌TGF-β,进一步增强炎症反应及组织损伤、修复。2.HMGB1特异性中和性抗体可显著改善心脏移植物的慢性排斥反应及血管病变和纤维化。