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背景和目的:转铁蛋白受体(TfR,CD71)是一种由两个同源二聚体组成的Ⅱ型跨膜糖蛋白,通过受体介导的内吞途径调控细胞对铁的摄取。TfR在肿瘤细胞表面高表达,具有内吞特性,在人类肿瘤发生发展过程中发挥重要作用,使得TfR成为运载胞毒药物治疗癌症的热点靶标。目前以转铁蛋白受体为靶点的肿瘤靶向治疗研究备受关注,能够有效递呈治疗药物入胞,包括化疗药物,细胞毒蛋白,大分子复合物等;从而产生胞毒效应,在患者体内及体外的一系列恶性肿瘤中引起生长抑制,诱导凋亡。本课题组前期已开展以TfR为靶点的肿瘤治疗研究:Tf或者抗TfR单克隆抗体偶联肽、多聚赖氨酸、PEI、纳米颗粒等,本身发挥细胞毒作用或者通过递呈多种治疗药物入胞发挥作用。为了准确评估TfR介导的体外药物运载的特异性,需要建立稳定高表达人TfR的细胞株,用其天然低表达TfR作为对照,为以后体内靶向抗TfR抗体偶联物的靶向显像与治疗研究奠定基础。方法:CHO细胞转染重组pEGFP-hTfR质粒并通过G41 8筛选稳转细胞系;通过Western Blot及流式细胞术和免疫荧光细胞化学检测方法检测hTfR的表达和功能;使用激光共聚焦显微镜记录Tf和TfR单克隆抗体与细胞结合,进一步获得活细胞动态图像;通过抗TfR单克隆抗体偶联高密度脂蛋白样纳米颗粒HPPS递呈系统评估hTfR-EGFP的靶向特异性。结果:酶切反应和DNA测序结果显示重组质粒成功构建;Western Blot结果显示所构建细胞系特异性表达分子量为95kd的人TfR分子;流式细胞术检测表明单克隆抗体与TfR结合在CHO-hTfR和转染空载EGFP质粒CHOvec细胞中有显著差异性(P<0.001),而CHO-hTfR和天然高表达TfR的HepG2细胞间无差异;激光共聚焦显微镜结果提示TfR主要表达在CHO-hTfR细胞表面,膜表达的hTfR可以介导Tf及抗TfR单克隆抗体的内吞;进一步使用共聚焦显微镜观察到活细胞hTfR-EGFP介导抗体和TfR融合内吞全部事件;混合培养EGFP+和EGFP-细胞,抗TfR单克隆抗体偶联HPPS纳米颗粒可以被CHO-hTfR特异性识别并摄取,CHO-hTfR细胞对HPPS和HPPS-mAb的摄取存在明显差异。结论:成功构建hTfR全长序列真核表达载体,获得稳定表达hTfR-EGFP并具有内吞功能的CHO细胞系。结果显示CHO-hTfR保持了天然hTfR高表达细胞的内吞特性,可以用来准确的评估偶联Tf或Abs治疗制剂的靶向特性,并观察其胞内循环途径,为以后的靶向显像与治疗研究奠定实验基础。