猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失。本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,分别构建了以5×甘氨酸为连接肽的重组腺病毒rAd-HS35和以口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白为连接肽的重组腺病毒rAd-HSA35。通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot可以检测到HSP/GP3,GP5蛋白的表达,证明重组腺病毒可以正确表达目的蛋白。以串联表达GP3/GP5(rAd-GP35)的重组腺病毒和野生型重组腺病毒(wtAd)为对照,研究该重组腺病毒在猪体内诱导免疫应答情况及对同源毒株攻毒的保护效果,结果表明,免疫rAd-GP35,rAd-HS35及rAd-HSA35的猪产生了PRRSV特异性的体液免疫应答,且rAd-HSA35诱导的中和抗体滴度明显高于rAd-GP35免疫组。同时,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪血清中的IFN-γ及IL-4的含量也明显升高。攻毒后,与wtAd和rAd-GP35免疫组相比,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪的临床症状较轻,病毒血症较低,肺部病理变化也较轻。此外,rAd-HSA35诱导的保护效力明显高于rAd-HS35。上述结果表明HSP70与GP3-GP5共表达可以增强PRRSV抗原的诱导的免疫应答并对同源毒株攻毒提供一定的免疫保护。重组腺病毒rAd-HSA35为防治高致病性PRRSV提供了可能。