【摘 要】
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[目的]探讨应用生长分化因子5 (growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)微团成软骨分化的可行性及效果.[方法]体外分离培养hMSCs,取第三代细胞实验.将hMSCs分别用无血清H-DMEM和含10,20,50,100 ng/ml GDF-5的软
【机 构】
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华中科技大学附属协和医院骨科,武汉,430022 华中科技大学协和医院骨疾病研究所
【出 处】
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全国骨关节与风湿病暨第三届武汉国际骨科高峰论坛
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[目的]探讨应用生长分化因子5 (growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)微团成软骨分化的可行性及效果.[方法]体外分离培养hMSCs,取第三代细胞实验.将hMSCs分别用无血清H-DMEM和含10,20,50,100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液(chondrogenic medium,CM)诱导,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测各组细胞的增殖情况.诱导2周后重悬细胞,以5×106/ml的细胞密度离心构建微团,继续诱导2周.RT-PCR检测两组细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达.免疫组化、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达.[结果]hMSCs呈梭形、漩涡状生长.100 ng/ml GDF-5诱导的hMSCs呈圆形或多角形.五组微团分别由无血清H-DMEM、含10,20,50,100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液诱导2周后,除H-DMEM组无Ⅱ型胶原mRNA、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达外,其它各组Ⅱ型胶原mRNA、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈浓度依赖性增加,各组差异均有统计学意义(P＜0.05).[结论]经一定浓度GDF-5诱导的hMSCs微团,Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达呈浓度依赖性增加,具有软骨的部分生物学功能.
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