【摘 要】
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乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)是黄病毒科黄病毒属的成员之一,可以引起人类脑炎.乙型脑炎病毒基因组复制与修饰依赖非结构蛋白5 (NS5),它由两个球形结构域
【出 处】
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首届东湖学术论坛暨2012年武汉病毒学研究生论坛
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乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)是黄病毒科黄病毒属的成员之一,可以引起人类脑炎.乙型脑炎病毒基因组复制与修饰依赖非结构蛋白5 (NS5),它由两个球形结构域之间通过一段柔性多肽链连接而成.其N-端结构域具有甲基转移酶(MTase)活性,参与病毒基因组5端加帽结构的合成；C-端结构域具有依赖RNA的RNA聚合酶(RdRP)功能,作为核心蛋白参与病毒基因组复制.虽然两个单独结构域的晶体结构在黄病毒属其它病毒中已有报道,但是NS5全长蛋白质晶体生长却是亟待突破的难点.本研究成功扩增了乙型脑炎病毒NS5全长基因片段并插入到pET-26b表达载体中,并应用大肠杆菌BL21 (DE3)菌株表达NS5蛋白.菌体收获后用高压匀质机破碎,收集上清液经处理后依次经过组氨酸标签亲和层析,阳离子交换层析与凝胶过滤层析纯化,收获高纯度单体蛋白,浓度可达10-20 mg/ml.应用结晶机器人结合使用晶体筛选试剂盒,16℃恒温生长一周,成功利用坐滴法获得了该蛋白的一种棒状晶体,并已经利用X-射线衍射方法获取了一套分辨率为3.6埃左右的较为完整的初步数据.目前正在进一步优化晶体生长条件,期望获取质量和分辨率更高的衍射数据并实现晶体结构解析,为进一步了解NS5的功能及针对该蛋白的抗病毒药物开发提供有益信息.
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