【摘 要】
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本研究基于前期获得的桑树转录组序列,选取桑树NBS 类家族基因进行全长克隆。采用RACE 技术结合RT-PCR方法分别克隆基因的3’、5’片段,成功获得了2 个基因的全长序列。
【机 构】
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广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所, 广州, 510610
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本研究基于前期获得的桑树转录组序列,选取桑树NBS 类家族基因进行全长克隆。采用RACE 技术结合RT-PCR方法分别克隆基因的3’、5’片段,成功获得了2 个基因的全长序列。其中CL93 基因全长2,109 bp,包含1,848 bp 的开放阅读框,编码615 个通读的蛋白质氨基酸序列,该基因编码蛋白产物具有典型的NB-ARC、p-loop、kinase-2a、kinase-3a、GLPL等保守结构域；Unigene14278 基因全长1,467 bp,包含1,170 bp 的开放阅读框,编码390 个通读的蛋白质氨基酸序列。二级结构分析显示CL93 和Unigene14278 基因都含有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲4 种二级结构,同时还含有4 个跨膜螺旋区域。进化树分析结果表明CL93 和Unigene14278 基因和川桑的序列最相似,其次是杨树、可可、柑橘等木本植物。荧光定量分析结果显示,CL93 基因在感病品种中受青枯菌诱导表达,而在抗病品种中受青枯菌抑制表达,表明CL93 基因可能跟抗病相关；Unigene14278 基因在抗/感病品种中都受青枯菌诱导,但在抗/感病品种中差异不显著。本研究为桑树抗病基因工程育种提供新的基因来源,具有重要的理论意义和应用价值。
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