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目的实验探究心肌缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/Re)过程中,钙敏感受体(Calciumsensing receptor,CaR)参与IP3通路引起肌浆网的内钙耗竭,诱发肌浆网过度应激及其凋亡的途径;同时探讨CaR通过线粒体-肌浆网膜(mitochondrial associated ER membrane,MAM)引起线粒体内钙的变化从而导致线粒体凋亡通路活化的机制。方法 (1)培养乳鼠心肌细胞模拟缺氧-复氧,应用IP3信号通路不同抑制剂证明CaR作用信号转导通路的靶点;激动CaR观察细胞内钙及肌浆网内钙变化情况;内质网应激蛋白和相关凋亡蛋白的表达和凋亡情况。(2)观察在缺氧-复氧中激动CaR时线粒体内钙的变化,检测线粒体势能,观察激动CaR对线粒体凋亡蛋白表达的影响。结果 (1)激光共聚焦显微镜结果显示,H-Re和Ca+Ni+Cd+H-Re组的细胞内钙明显升高。NPS-2390+Ca+Ni+Cd+H-Re和2-APB+Ca+Ni+Cd+H-Re组明显低于Ca+Ni+Cd+H-Re组。(2)Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡。心肌细胞凋亡率在H-Re、Ca+Ni+Cd+H-Re和Gd+Ni+Cd+H-Re组明显高于NPS-2390+Ca+Ni+Cd+H-Re、2-APB+Ca+Ni+Cd+H-Re和Ru+Ca+Ni+Cd+H-Re组。(3)线粒体内钙浓度和线粒体膜电位的检测结果显示:在Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度显著升高,线粒体膜电位明显下降;在2-APB+Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙浓度维持在较低水平,线粒体膜电位维持在较高水平。本实验应用线粒体钙单向转运体的抑制剂(Ruthenium red),在Ru+Ca+Ni+Cd+H-Re组,线粒体内钙维持在较低的水平,而线粒体膜电位维持在较高的水平。(4)Westernblot结果显示,CaR的表达在H-Re组和Ca+Ni+Cd+H-Re组明显升高;内质网应激蛋白GRP78,p-PERK/PERK,ATF6的表达在H-Re、Ca+Ni+Cd+H-Re和NPS-2390+Ca+Ni+Cd+H-Re组明显升高;内质网过度应激相关的凋亡蛋白caspase-12,p-JNK/JNK的表达在H-Re和Ca+Ni+Cd+H-Re组明显升高。线粒体途径诱发细胞凋亡的相关蛋白BAP31、bax、bad和cyt c的表达在H-Re和Ca+Ni+Cd+H-Re组均明显升高。结论 (1)CaR通过活化IP3通路,诱导内质网钙耗竭和内质网过度应激进而引起缺氧-复氧所致的心肌细胞凋亡。(2)CaR通过MaM引起线粒体内钙增加,激活线粒体凋亡途径而导致心肌细胞凋亡。