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背景:真菌所产生的次级代谢产物具有多种多样的生物活性,已被广泛应用于医药领域.在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)中发现的LaeA是一个假想的甲基转移酶,能够影响构巢曲霉中柄曲霉素、青霉素、色素等多种次级代谢产物的合成,在烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)等丝状真菌中发现的LaeA也具有类似的功能.本实验室已成功从产美伐他汀的橘青霉中克隆得到laeA基因.目的:初步探究Pci-LaeA在橘青霉中对其生长、发育和次级代谢产物合成的调控作用,并通过基因工程改造提高橘青霉中重要次级代谢产物美伐他汀(mevastatin/ML-236B/compactin)的生物合成量.方法:首先建立根癌农杆菌介导的橘青霉遗传转化体系;在此基础上通过同源双交换的方法构建Pci-laeA的缺失、回补以及高表达菌株;研究橘青霉野生型和重组橘青霉在生长形态、发育特征和次级代谢产物合成种类和含量的变化情况;通过qPCR定量分析Pci-laeA与ML-236B次级代谢合成基因簇中的途径特异性调控因子mlcR表达情况.结果:目前已经建立起了以根癌农杆菌LBA4404介导的橘青霉的遗传转化体系,当LBA4404(PpGiHTG)的OD600nm=0.4,在325MEA平板上生长4天的橘青霉(ATCC:38065)分生孢子浓度为107个/ml时按照1∶1的比例混合后在诱导培养基上共培养48h,经筛选可以获得较多的转化子.后期构建Pci-laeA的缺失和回补载体,并对突变菌株的生长、发育、次级代谢产物和相关生物合成基因和途经调控因子mlcR的表达情况进行分析.结论:成功构建LBA4404介导的橘青霉遗传转化体系.推测Pci-LaeA也会影橘青霉的生长、发育和次级代谢产物的合成,对次级代谢产物ML-236B合成的影响很可能是通过影响其途径特异性调控因子mlcR的转录表达实现的.