用于发酵血粉黑曲霉菌株的筛选及发酵条件的优化

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血粉含有多种营养物质和生物活性物质,潜在营养价值很高。血粉的蛋白质含量高达80%以上,是蛋白质含量最高的动物蛋白原料。然而,现今的血粉产品问题较多,如消化吸收率不高,营养平衡性不佳,以及血腥味比较大、适口性差等。因此血粉是一种还未很好开发利用的饲料。为解决上述问题,许多科研工作者对喷雾干燥法、酶解法、发酵法等工艺进行了研究。本试验通过紫外线照射对黑曲霉进行诱变,以福林-酚显色法测定的蛋白酶活力结果为依据,从诱变产生的200株菌株中筛选出1株高产酸性蛋白酶菌株,并利用筛选菌株对血粉进行发酵。主要通过微生物发酵法加工血粉,即将血粉拌入孔性载体如麦麸、米糠中,接种蛋白分解菌,经过一系列酶促反应,将畜禽血蛋白降解为肽、短肽和氨基酸。通过固体摇瓶发酵,以水解度为检测指标,采用茚三酮显色法探讨发酵温度、发酵时间、接种量、pH值、料水比等因素对血粉发酵的影响。并在这些单因素试验的基础上,利用SPSS18.0软件比较组间差异,确定3个主要影响因素,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,采用三因素三水平响应曲面分析法,以血粉发酵后的水解度为响应值作响应面,摸索血粉发酵的最适条件并制备出蛋白、氨基酸含量高、消化率高的发酵血粉。结果表明:(1)筛选出的菌株酶活与出发菌株相比提高了59.79%其所产的酸性蛋白酶的最适温度为45℃,最适pH值为2.5,最适发酵产酶时间为84h。(2)通过单因素实验以及在此基础上通过三因素三水平响应面法实验,建立了响应值与各因素之间的数学模型,依此模型可以预算理论水解度。对水解度影响较大的三个因素的Prob>F值相差较大,对提取结果的影响顺序为:发酵温度>发酵时间>接种量。(3)试验得到的发酵优化条件为:发酵温度37.7℃、发酵时间89.4h、接种量9.12%。水解度预测最大值为31.62%、pH值5.0、料水比1:1。经实验验证,在以上优化条件下,发酵血粉的水解度为31.43%,与预测结果基本相符,响应面设计模型有效。以上结果表明:利用紫外诱变得到的高产酸性蛋白酶的黑曲霉菌株发酵血粉,有助于血粉的降解,为血粉在饲料行业中的开发利用提供理论依据。
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