【摘 要】
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采用SOEingPCR技术将PRRSVGP5和GP4蛋白优势抗原表位基因片段进行体外拼接,构建得到两个双表位串联重复序列E54-2和E54-4.将两个基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1载体,成功构
【机 构】
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中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京海淀,100094
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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采用SOEingPCR技术将PRRSVGP5和GP4蛋白优势抗原表位基因片段进行体外拼接,构建得到两个双表位串联重复序列E54-2和E54-4.将两个基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1载体,成功构建出原核表达重组质粒pGEX-6P-E54-2和pGEX-6P-E54-4.重组质粒pGEX-6P-E54-2和pGEX-6P-E54-4分别转化E.coliBL21细胞,经诱导表达获得重组融和蛋白GST-E54-2和GST-E54-4,表达量分别为40﹪和30﹪.Western-Blotting检测结果表明纯化的重组融合蛋白能与PRRSV阳性血清和鼠源抗GP4和GP5血清发生特异性反应.用融合蛋白GST-E54-2和GST-E54-4,以及表达GST-E54-2和GST-E54-4融合肽的基因工程全菌体免疫小鼠,能诱导产生特异性抗PRRSVGP4和GP5抗体.3免后检测血清的中和抗体效价,表明E54-2全菌免疫组和纯化蛋白免疫组可达1∶22.2和1∶19.9;E54-4全菌免疫组和E54-4纯化蛋白免疫组为1∶45.7和1∶33.9.
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