【摘 要】
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为了建立用于检测导致猪增生性肠炎(PPE)的胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)的荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的LI基因组aspA序列,应用分子生物学软件优化设计1
【机 构】
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山东省滨州市畜牧兽医局,山东滨州256600
【出 处】
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第九届南京农业大学畜牧兽医学术年会暨生猪标准化与生产效益持续提升研讨会
论文部分内容阅读
为了建立用于检测导致猪增生性肠炎(PPE)的胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)的荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的LI基因组aspA序列,应用分子生物学软件优化设计1对特异性引物,经PCR扩增出300bp的目的片段.产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验.结果显示:建立的检测方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,r2=0.9979,产物TM在85.0～85.3℃之间,灵敏度为17.5个拷贝/μL,特异性和重复性较好,可用于临床PPE的诊断.本试验成功建立了检测PPE的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法,为LI的早期鉴别诊断以及PPE的致病机理研究提供了技术支持,也为PPE分子诊断试剂盒的研制奠定了技术基础.
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