论文部分内容阅读
目的探究长链非编码RNA(lncRNA)BRE-AS1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用。方法本研究收集91例原发性NSCLC患者的癌组织和配对癌旁组织,利用RT-qPCR对人群组织中BRE-AS1表达水平进行检测,并与之前lncRNA芯片高通量筛选结果及TCGA数据库结果相比较。应用条件logistic回归分析BRE-AS1对NSCLC发病风险的影响,通过ROC曲线评价其在NSCLC诊断中价值,应用卡方检验分析其与临床病理参数的相关性。利用慢病毒BRE-AS1过表达稳定转染A549细胞,分别应用MTT、流式细胞术、细胞划痕实验检测BRE-AS1对A549细胞增殖、周期、凋亡及迁移的影响。应用Western Blot技术检测过表达BRE-AS1对PI3K-AKT信号通路关键蛋白表达水平的变化。结果 BRE-AS1在NSCLC组织中显著性低表达,其表达水平为癌旁组织的7.6%,该结果与前期高通量lncRNA芯片筛选结果及TCGA数据库分析结果相一致(Microarray FC=-5.06,TCGA FC=-4.85,P<0.05)。BRE-AS1表达水平与NSCLC发病风险负相关(OR=0.362,P<0.001)。BRE-AS1对NSCLC诊断有一定效力(AUC=0.916,P<0.01)。BREAS1异常表达水平与肺癌患者性别、年龄及病理类型有关(P<0.05),其表达在小于50岁的女性肺腺癌患者中显著低于大于50岁的男性肺鳞癌患者。经慢病毒BRE-AS1过表达稳定转染后A549细胞MTT结果显示LV-BRE-AS1组细胞生长增殖能力降低(P<0.05)。细胞周期结果显示,LV-BRE-AS1组细胞S期比例减少,G2/M期比例增加(P<0.01)。细胞凋亡结果显示,LV-BRE-AS1组中晚期及总凋亡比例增加(P<0.05),细胞划痕实验结果显示,LV-BRE-AS1组迁移能力略呈降低趋势,但无统计学意义(P>0.05)。提示过表达BRE-AS1可抑制A549细胞增殖能力,诱导A549细胞阻滞于G2/M期,诱导A549细胞凋亡升高。对PI3KAKT-mTOR信号通路关键蛋白进行Western Blot检测,结果显示,与阴性对照组相比,LV-BRE-AS1组中PI3K、AKT3、m TOR、S6K及BCL-XL蛋白表达水平明显降低。提示BRE-AS1可能通过对PI3K-AKT3-mTOR信号通路关键蛋白的表达影响参与肺癌的发生发展。结论 BRE-AS1在非小细胞肺癌中显著低表达,可作为肺癌候选诊断生物标志,过表达BRE-AS1可抑制A549细胞增殖、使细胞阻滞于G2/M期、诱导细胞凋亡,其机制可能与BRE-AS1对PI3K-AKT-mTOR信号通路的抑制有关。