论文部分内容阅读
自然界及生物体内存在的菌种具多样性且互相消长平衡,当使用抗菌剂后,所能幸存的大多为具有抗药性的菌种.目前虽然不断研发对抗抗药性菌种的抗菌剂,但在大量使用抗菌剂的情况下,易对细菌产生选择性压力,使得抗药性菌种的产生不曾间断.因此,若持续滥用各种不同的抗菌剂,则最后所存留的必定是具有多重抗药性的菌种,这些菌种势必成为感染症治疗的困境.此篇研究中针对病鸡沙门氏杆菌之血清型别鉴定与利用聚合酶链锁反应侦测多种抗菌剂之抗药性基因,分析沙门氏杆菌血清型与其抗药性基因之相关性,以期找出沙门氏杆菌对乙内酰胺类、氯霉素类与四环素类抗菌剂之抗药性机制,达到有效利用抗菌剂目的.本研究收集国立嘉义大学农学院附设云嘉南动物疾病诊断中心送检鸡只病例之肝脏,依据美国联邦食品药物管理局与美国农业部食品安全与检察署所订定之细菌学分析手册,应用沙门氏杆菌建议培养流程将肝脏组织进行沙门氏杆菌培养、分离与鉴定.所得沙门氏杆菌菌株利用XbaI限制酵素选择性切割基因体后进行脉冲式电泳(pulsed field gel electrophoresis)分析与比较基因差异,而完成沙门氏杆菌血清型别鉴定之目的.依照临床实验室国家标准委员会(Clinical Laboratory StandardIntistitute)的标准操作程序,使用ampicillin、amoxicillin、amoxicillin /clavulanic acid、cefazolin、streptomycin、gentamicin、oxytetracycline、doxycycline、chloramphenicol、florfenicol、sulfamethoxazole/trimethroprim、nalidixic acid、flumequine、enrofloxacin、ciprofloxacin 与colistin 等抗菌剂,对于鸡只所分离之沙门氏杆菌以肉汤微量稀释法(micro-broth dilution)进行药物最小抑菌浓度试验(minimal inhibitory concentrationtest；MIC),并计算各种药品其MIC50、MIC90 与抗药性比率,以评估鸡沙门氏杆菌之药物感受性.同时,萃取鸡沙门氏杆菌细菌质体后利用聚合酶链锁反应(Polymerase chain reaction)分别针对乙内酰胺类(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaPSE 与ampC)、氯霉素类(cmlA 与floR)与四环素类(tetA、tetB、tetC、tetD 与tetM)等抗菌剂之抗药性基因进行检测.自2011 年7 月1 日至2013 年7 月31 日收集所得的沙门氏杆菌共计253 株,以S.Albany(85 株)、S.Typhimurium(46 株)与S.Schwarzengrund(33 株)等血清型最为常见.根据抗微生物药物最小抑菌浓度结果显示：对streptomycin 之抗药性最高(98.02％,248/253),在ACSSuT(ampicillin、chloramphenicol、streptomycin、sulfamethoxazole/trimethroprim 与oxytetracycline)抗药性均达75%以上,且单一菌株具有ACSSuT 多重抗药性之比例亦高达71.15%(180/253).在抗药性基因检测方面,乙内酰胺类中以blaPSE 与blaCTX-M 检出比例较高(56.52%与53.75%),blaTEM 与ampC 次之(30.04%与15.81%),而blaSHV 最低(1.58%).氯霉素类的cmlA 为92.49%,floR 则为68.38%.四环素类中则以tetA 的检出率最高(97.23%),tetD、tetB、tetM 次之,而tetC 仅有3.95%.由实验结果得知,在S.Albany、S.Typhimurium 与S.Schwarzengrund 等常见血清型中,大多数的菌株不仅为多重抗药性表现型,亦带有多重抗药性基因的相关质体,显示现今所规范之抗菌剂已不足以对抗大多的鸡只沙门氏杆菌.