【摘 要】
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RNAi(RNA interfererice)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siNl
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春 130122
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会
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RNAi(RNA interfererice)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siNl和siN2)在细胞中的表达水平，设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8)，成功地建立了最优的siNl和siN2的茎环法RT．qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度，能检测出10。至10。个拷贝的siRNA，至少可达7个数量级的检测范围，平行性好(Rsp=0．999)，扩增效率高(Eff．=98．2％)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siNl／siN2表达水平，可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性，为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。
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