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目的:研究EPO促进骨再生作用机理,探讨载EPO壳聚糖温敏水凝胶促兔上颌窦提升骨再生作用。材料与方法:采用Real Time PCR、组织化学染色检测EPO对成骨细胞相关基因、Eph B4表达、ALP活性和钙结节数量影响;诱导小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化,经Real Time PCR、TRAP染色检测EPO对破骨细胞相关基因、ephrin B2表达及TRAP阳性细胞数和骨吸收陷窝数量变化,观察破骨细胞分化过程中EPO对破骨细胞数量和功能的影响。在诱导成骨细胞分化前加入ephrin B2-Fc模拟成骨细胞破骨细胞共培养体系,通过ephrin B2 si RNA和Eph B4 sh RNA沉默破骨细胞或成骨细胞中ephrin B2或Eph B4基因,检测阻断Eph B4/ephrin B2信号后EPO对成骨/破骨细胞分化的影响。体内建立大鼠拔牙模型,通过骨密度测量和组织学验证EPO对骨修复能力的影响。以壳聚糖、明胶(GA)和β-甘油磷酸钠(GP)为原料,利用离子交联的方法制备载EPO壳聚糖温敏性水凝胶(CS/GP/GA),通过体内和体外实验观察其对骨再生作用。结果:EPO可以增加成骨细胞Runx2、Sp7和ColⅠ的表达,增强ALP活性和增加钙结节数量,同时EPO增加了Eph B4的表达;EPO先通过增加c-fos和NFATc1表达增加了破骨细胞数量,随后下调了Ctsk和MMP9的表达,抑制了破骨细胞活性,同时EPO增加了ephrin B2的表达;EPO可以通过增加的ephrin B2上调成骨细胞相关基因的表达,促进成骨细胞的分化和骨形成功能;阻断Eph B4基因转录后EPO促进成骨细胞分化的作用被减弱;体内实验结果显示,EPO降低了剩余牙槽骨的吸收量,促进了牙槽骨损伤的修复。采用ELISA方法检测CS/GP/GA释放EPO的速率,发现2h内EPO的突释率达到40%,96h释放达到78%,15d内累计释放率达到94%;将载有200单位EPO的CS/GP/GA凝胶植入兔上颌窦中,12周后EPO-CS/GP/GA组兔上颌窦内新骨形成量和成骨细胞数量明显多于单纯载PBS凝胶组。结论:EPO通过ephrin B2/Eph B4双向信号促进成骨细胞分化及其骨形成;EPO-CS/GP/GA可以有效地促进兔提升上颌窦骨再生作用。载EPO壳聚糖水凝胶有望应用于骨量不足患者的种植义齿修复。