【摘 要】
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本研究建立了用于快速、准确检测microRNA-224（miRNA-224）的基于酶放大的胶体金侧流层析试纸。将胶体金用HRP酶和DNA进行双标记,并喷涂于玻璃纤维上制备成金标垫,将捕获探针和
【机 构】
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北京科技大学生物工程与传感技术研究中心;
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本研究建立了用于快速、准确检测microRNA-224（miRNA-224）的基于酶放大的胶体金侧流层析试纸。将胶体金用HRP酶和DNA进行双标记,并喷涂于玻璃纤维上制备成金标垫,将捕获探针和控制探针分别包被在硝酸纤维素膜上,形成检测线和控制线,通过金纳米颗粒上标记的DNA检测探针、miRNA-224及生物素化的DNA捕获探针的三明治结构反应,使金纳米颗粒积聚在检测线上,金纳米颗粒表面的HRP与TMB/H2O2底物液发生反应,产生不溶性的蓝色固体,并沉积在金纳米颗粒表面,使检测线的颜色加深,通过观察检测线和控制线颜色的变化,实现了溶液及A549细胞液中目标miRNA-224的快速检测,并通过金标试纸阅读分析仪可以实现miRNA-224的定量测量,在最优条件下,建立峰面积与miR-224对数浓度曲线图,两者在7.5pM-75nM范围内呈现良好的线性关系,其检测限为7.5pM,相比于之前报道的无酶放大策略的胶体金侧流层析试纸提高了10倍。该方法简单、方便,分析时间短,外界干扰小,储存时间长,为临床应用提供了重要的潜在应用价值。
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