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目的：研究建立肿瘤溶瘤基因治疗产品——重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒GM-CSF的检测方法与质控标准。方法：采用限制性内切酶酶切与PCR法结合，对重组病毒载体携带的GM-CSF基因、以及ICP 34.5、ICP6、ICP47等单纯疱疹病毒基因改造结构进行鉴定。A260紫外吸收法检测病毒颗粒数；pfu法测定重组病毒感染活性。重组病毒体外感染人乳腺癌肿瘤细胞MCF-7后，以ELISA法和TF-1细胞特异增殖法分别测定感染上清中GM-CSF表达量以及表达产物的生物学活性；体外感染人乳腺癌肿瘤细胞MCF-7后，测定该重组病毒对肿瘤细胞的杀伤活性；重组病毒分别以相同MOI感染人乳腺癌肿瘤细胞MCF-7与二倍体人胚肺成纤维细胞MRC-5后，分别测定感染上清中子代病毒的感染活性，并以子代病毒的感染活性比值来分析该制品在肿瘤细胞中的复制增殖特异性。采用PCR法控制野生型单纯疱疹病毒等外源病毒的残留。结果：对重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒GM-CSF基因组的酶切、以及对所携带的GM.CSF基因、ICP 34.5、ICP6、ICP47基因改造的PCR.鉴定结果与理论值相符。病毒载体颗粒数为4.5×1010VP/ml，感染活性分别为4.3×10Tpfu/ml。重组病毒以MOI 0.01感染MCF-7细胞72h后，ELISA检测上清中GM-CSF表达量为228n/ml，以上述条件感染MCF-7细胞72h后，表达产物GM-CSF的生物学活为4.3×103IU/ml。该基因治疗制剂对人乳腺癌肿瘤细胞MCF-7体外杀伤的MOIic50为0.08。以相同MOI感染并经pfu法检测，重组病毒在人乳腺癌肿瘤细胞MCF-7与人胚肺成纤维二倍体细胞MRC-5的增殖比值为308。未检出野生单纯疱疹病毒，PCR灵敏度为10copy。其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及2005版《中国药典》(三部)要求。结论：初步建立了重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒GM-CSF(HSV-I/GM-CSF)的的质量控制方法与质量标准，并已用于该制品的质量控制，同时也为其他溶瘤肿瘤基因治疗病毒载体的质量控制奠定了基础。