【摘 要】
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目的：构建前列腺干细胞抗原(PSCA)单链抗体与碱性磷酸酶(AP)的融合表达载体,并进行原核表达和鉴定。方法：根据大肠杆菌的密码子偏爱性进行碱基优化,合成抗PSCA的单链抗体基
【机 构】
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贵州医科大学生物与工程学院,贵州省 贵阳市 550025
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目的：构建前列腺干细胞抗原(PSCA)单链抗体与碱性磷酸酶(AP)的融合表达载体,并进行原核表达和鉴定。方法：根据大肠杆菌的密码子偏爱性进行碱基优化,合成抗PSCA的单链抗体基因PaFv基因,用Sfi I和Not I限制性核酸内切酶分别酶切、连接至含有AP编码序列的pDAP2/S载体上,转化大肠杆菌XL1-Blue中诱导表达,Western blot检测融合蛋白的表达情况,并测定融合蛋白活性。结果：PCR鉴定和序列测定显示抗PSCA单链抗体基因成功构建到pDAP2/S载体中,分析结果表明单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在重组大肠杆菌中表达形式为包涵体,具有融合蛋白的活性。结论：成功构建并表达了抗PSCA单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白,为进一步发展以PSCA为靶点的前列腺癌快速免疫诊断方法奠定了基础。
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