草莓镶脉病毒SVBV的RT-PCR检测

来源 :第十届中国(大连·金州)草莓文化旅游节会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RRR6670
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本研究根据草莓镶脉病毒基因组序列设计PCR引物,用于筛选不同草莓样品,通过优化RT-PCR反应体系,建立了能稳定灵敏的检测草莓镶脉病毒技术体系.应用检测体系,成功对SVBV病毒侵染的草莓叶片材料进行了RT-PCR扩增,得到了期望大小的条带278bp特异带.测序后经blast序列比对,结果表明该特异带为草莓镶脉病毒序列.以此片段利用pEASY-T5Zero克隆载体构建重组质粒作为标准品,将标准重组质粒用NanoDrop2000进行浓度检测,按10倍梯度稀释成108~101拷贝/μl,建立了检测SVBV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法.结果表明,此方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可达到101拷贝/μl,约为普通PCR的1000倍;用该方法检测了部分草莓品种的DNA样品.该方法具有很高的敏感性和稳定性,可用来快速检测草莓植株是否感染SVBV.
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