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混合菌群EMSDS对玉米秸秆具有优良的降解效果,本课题组前期研究表明该菌群可产碱性木聚糖酶,少量纤维素酶和阿魏酸酷酶。本研究利用宏基因组克隆文库筛选技术,对菌群EMSDS的宏基因组进行克隆文库构建,并通过酷酶基因筛选培养基,在总共25000个克隆中筛选得到一个果胶酷酶基因,经提交GeneBank数据库比对后,发现该基因与肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)的果胶酷酶基因同源性高达99960序列分析显示该果胶醋酶基因的开放阅读框长度为1284 by,所编码的蛋白分子量为45.3kDa。进一步对来源于肺炎克雷伯氏杆菌杆菌的果胶酷酶基因进行克隆表达。生物信息学分析结果显示,该果胶醋酶存在一对二硫键桥。为促进该蛋白的正确折叠,提高可溶性,本研究使用了携带组氨酸标签的pET-22b原核表达系统在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)进行异源表达。该系统可编码信号肤,能够将目的蛋白引入大肠杆菌的周质空间,从而促进蛋白的正确折叠。将果胶醋酶基因连接至pET-22b进行表达并利用镍柱纯化,SDS-PAGE电泳分析结果显示该表达系统产生的蛋白有较高可溶性,镍柱纯化后电泳条带单一,纯化效果较好。