【摘 要】
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通过扩增狂犬病病毒ERA株的P基因并定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得阳性P基因重组质粒pET-P,转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导并优化诱导条件,使其在大肠杆
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院; 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室;
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通过扩增狂犬病病毒ERA株的P基因并定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得阳性P基因重组质粒pET-P,转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导并优化诱导条件,使其在大肠杆菌中以可溶性表达为主。SDS-PAGE电泳分析发现,重组质粒pET-P成功的表达出大小约50 KD的融合蛋白,用Ni-NTA亲和层析在非变性条件下纯化P蛋白,获得纯度较高的蛋白,Western blot鉴定纯化后的P蛋白,结果表明纯化后的P蛋白均可被RV阳性血清和抗His的单克隆抗体识别,证实其免疫原性良好且成功融合表达了His标签蛋白,高纯度P蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,本研究制备的抗体经Westernblot和间接免疫荧光鉴定,都能特异性的识别狂犬病病毒感染细胞中表达的P蛋白,具有较好的特异性,制备的抗P蛋白的抗血清将为进一步研究P蛋白的潜在功能打下良好的基础。
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