【摘 要】
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<正>目的观察体外诱导CD4+CD25_效应T细胞转化的CD3+CD4-CD8-双阴性T调节细胞(double negative T cells,DN Tcells)是否能抑制B细胞增殖,探讨其作用机制,使其成为一种可行的
【机 构】
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北京大学人民医院肝胆外科; 首都医科大学附属北京友谊医院实验中心;
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<正>目的观察体外诱导CD4+CD25_效应T细胞转化的CD3+CD4-CD8-双阴性T调节细胞(double negative T cells,DN Tcells)是否能抑制B细胞增殖,探讨其作用机制,使其成为一种可行的抑制慢性排斥反应的体细胞治疗手段。方法提取6—8周龄C57BL/6幼稚小鼠的脾脏及淋巴结,分离提纯CD4+CD25_效应T细胞,并从DBA/2小鼠骨髓中提取并经过培养获得的脂多糖活化的成熟树突状细胞,按照4:1比例共培养于96孔U型培养板中,对照组中未加入白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),实验组中加入50ng/ml的IL-2培养6天收获细胞,流式细胞仪分选出DN T细胞。同时将B6-Prf(C57BL/6-Perforin KO)小鼠提纯CD4+CD25_效应T细胞,用上述方法转化并流式分选出DN T细胞。免疫磁珠分选方法提取C57BL/6小鼠和B6-lpr(C57BL/6-Fas KO)小鼠CD19阳性B细胞,用抗-CD40抗体(终浓度为5μg/ml))和脂多糖(终浓度为20μg/ml)刺激增殖,同时加入不同比例的DN T细胞(DNTcells:Bcells,1:1,1:2,1:4,1:8),培养
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