论文部分内容阅读
目的：构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037)，根据文献筛选出一个靶序列错误！未找到引用源.，设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸，与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒，此慢病毒重组质粒与慢病毒包装混合物共转染293T细胞，包装产生慢病毒，收集病毒上清，采取系列稀释法测定慢病毒滴度.然后转染人树突状细胞(hDCs)，通过荧光显微镜观察细胞转染情况，利用荧光实时定量PCR和western-blot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况.结果：将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功.荧光实时定量PCR及western-blott检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后，与空白对照组及阴性对照组比较，明显抑制了SOCS1的表达.结论：构建的pRNA-Lenti-SOCs1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达.hDC-SOCS1基因RNAi慢病毒载体的构建成功，为进一步研究DC增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础.