论文部分内容阅读
研究背景Crigler-Najjar-Ⅰ综合征（CNS）是一种伴有核黄疸的新生儿非溶血性家族性黄疸,为先天性间接胆红素血症的最严重的一种。CNS-Ⅰ型是一种罕见的常染色体隐性遗传病。该病致病基因是UGT1A1,位于2q37。CNS-Ⅰ由于肝细胞内微粒体重葡萄糖醛酰转移酶的缺乏,影响胆红素的结合,患者在出生后迅速出现显著、持续的黄疸,血清间接胆红素为300～850umol/L,通常大于340umol/L,用苯巴比妥诱导治疗后,症状不改善。胆内无直接胆红素,早期即出现核黄疸,死亡率高,预后极差。目的本文对来自两个无关家庭的两例临床诊断为CNS-Ⅰ的患儿及父母进行UGT141基因突变分析。方法经知情同意后,采集患儿及父母外周血5ml,常规蛋白酶K-SDS-酚/氯仿法提取基因组DNA。设计PCR引物扩增UGT1A1基因增强子区（PBRREM）,启动子区和编码区（5个外显子及外显子-内含子交界处）进行序列分析。应用Real-time PCR测定UGT1A1基因的拷贝数。根据突变类型、氨基酸保守性分析和突变氨基酸在蛋白质三级结构中的位置,评估突变的致病性。结果1.第一例患儿基因序列分析显示共携带4种突变。母源突变为PBREM区的-3290T>G、启动子区的（TA）6/（TA）7TAA和c.237243delCCCTGTG（P.Pro80HisfsX6）;父源突变为c.1 156G>T（P.Val386Phe）。母源的c.237243delCCCTGTG移码突变导致提前出现终止密码,不能表达正常功能的酶,是母源主要的致病突变;而PBREM区和启动子区的变异为多态性位点,可以降低产物酶的表达量。2.第二例患儿基因序列分析显示仅检测到1种c.1253delT（P.Met418ArgfsX5）纯合突变,患者父亲为c.1253delT（p.Met418ArgfsX5）杂合突变,患者母亲测序结果正常。Real-time PCR相对定量分析显示母亲和患儿为UGT1A1基因单拷贝缺失。结合拷贝数分析,第二例患儿的c.1253delT（p.Met418ArgfsX5）突变为半合子突变。3.c.1 156G>T（P.V386F）、c.237243delCCCTGTG（P.Pro80HisfsX6）、c.1253delT（p.Met418ArgfsX5）突变和UGT1A1基因缺失均未见国内外报道。结论1.c.237 243delCCCTGTG（p.Pro80HisfsX6）和c.1253delT（p.Met418ArgfsX5）移码突变导致提前出现终止密码,以及UGT1A1基因缺失均不能表达正常功能的酶,是致病性突变;2.c.1156G>T（P.Val386Phe）错义突变,经过SIFT和Polyphen对其进行蛋白功能预测,结果提示为有害突变,对蛋白酶的功能影响尚需进一步研究。3.