论文部分内容阅读
锌作为动物必需的微量元素之一,在维持机体正常生理功能和生化代谢等方面发挥着重要作用。本试验旨在研究不同锌源对猪肠道上皮细胞增殖及锌吸收相关转运蛋白基因水平的影响。试验以IPEC-1为研究对象,分别在IPEC-1细胞培养液中添加锌浓度为0、50、100、200μmol/L的三种不同锌源(甘氨酸锌、蛋氨酸锌、硫酸锌)培养6 h、12 h、24 h,MTT比色法测定细胞增殖变化;其次选用锌浓度为0、50、100、200μmol/L的甘氨酸锌及锌浓度为50μmol/L的三种不同锌源分别作用于IPEC-1细胞,6 h后,提取细胞总RNA,Real-time PCR法测定MT1、DMT1、ZIP4、ZIP5、ZnT1、ZnT2基因mRNA表达水平,以β-actin mRNA水平作为内参对照。试验结果表明:(1)在细胞培养前24 h,三种不同锌源均显著抑制猪肠道上皮细胞的生长,其中甘氨酸锌细胞毒性最小。不同锌源均存在明显的剂量效应,IPEC-1细胞活性随着锌浓度的提高而显著下降,其中以6 h的下降幅度最小且不同锌源之间无显著差异。(2)Real time PCR测定表明,甘氨酸锌均能显著提高猪肠道上皮细胞MT1、ZnT1 mRNA表达水平(P<0.05)。甘氨酸锌处理IPEC-1细胞6 h后,50μmol/L的添加量可显著增加DMT1mRNA表达(P<0.05),而高浓度锌添加量(100、200μmol/L)均显著降低其表达量(P<0.05)。ZIP4、ZIP5、ZnT2 mRNA表达存在剂量依赖效应,其中ZIP5、ZnT2 mRNA表达均随锌浓度的增加而显著升高(P<0.05),ZIP4 mRNA表达随锌浓度增加而降低(P<0.05)。通过比较发现,三种不同锌源对猪肠道上皮细胞锌吸收相关转运蛋白的调控存在显著差异。与硫酸锌组和蛋氨酸锌组相比,甘氨酸锌组可显著上调MT1、DMT1及ZIP4 mRNA表达水平(P<0.05),并显著下调ZnT2 mRNA表达水平(P<0.05)。甘氨酸锌组和蛋氨酸锌组ZIP5 mRNA表达水平均显著低于硫酸锌组(P<0.05),ZnT1mRNA表达水平均显著高于硫酸锌组(P<0.05),其中甘氨酸锌组和蛋氨酸锌组差异不显著(P>0.05)。综上所述,本试验条件下,高剂量的不同锌源均可抑制猪肠道上皮细胞增殖,其中以甘氨酸锌的细胞毒性最小。添加甘氨酸锌可上调MT1、DMT1、ZIP5、ZnT1、ZnT2 mRNA表达,下调ZIP4 mRNA表达。同时三种锌源对肠道锌相关调控基因的表达存在差异,需要进一步研究证实。