【摘 要】
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本研究参照胸膜肺炎放线杆菌血清1型apxⅣA基因序列合成两条特异性引物,从本实验室分离鉴定的菌株中扩增到apxⅣA3,大小2993bp,克隆到pMD-18T中构建克隆载体pTapxⅣA3,鉴定后,将apxⅣA3插入原核表达载体pET-28b,构成原核表达载体pETapxⅣA3.将pETapxⅣA3转化BL21(DE3),IPTG诱导,apxⅣA3成功获得表达,即ApxIVAC,表达的特异性带115
【机 构】
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华中农业大学动物医学院动物病毒室(湖北武汉)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
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本研究参照胸膜肺炎放线杆菌血清1型apxⅣA基因序列合成两条特异性引物,从本实验室分离鉴定的菌株中扩增到apxⅣA3,大小2993bp,克隆到pMD-18T中构建克隆载体pTapxⅣA3,鉴定后,将apxⅣA3插入原核表达载体pET-28b,构成原核表达载体pETapxⅣA3.将pETapxⅣA3转化BL21(DE3),IPTG诱导,apxⅣA3成功获得表达,即ApxIVAC,表达的特异性带115KD.Dot blotting证实ApxIVAC具有免疫学活性.ApxIVAC主要以包涵体形式存在,将包涵体变性、复性后,免疫Balb/c鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0融合,经筛选、克隆后获得5株稳定分泌抗ApxIVC单克隆抗体的杂交瘤细胞,为研究ApxIV的作用机制提供了特异性的试剂.
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