【摘 要】
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利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK15细胞中的互作蛋白进行了筛选。首先采用直接退火方法合成含有PCV2复制起始处的54个双链核
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨
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利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK15细胞中的互作蛋白进行了筛选。首先采用直接退火方法合成含有PCV2复制起始处的54个双链核苷酸的茎环结构(Stem-loop),将合成的序列与线性化的pAbAi载体连接构建重组诱饵质粒,将重组诱饵质粒线性化转化并整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株,通过不同浓度的AbA检测诱饵菌株的表达抗性；提取PK15细胞总RNA,采用SMART技术合成PK15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆；通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,序列分析确认。
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