【摘 要】
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目的:研究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分组:将培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为5组,即(1)正常对照(Con)组;(2)缺氧/复氧(H/R)组;(3)S1P低浓度(L)组;(4)S1P中浓度(M)组;(5)S1P高浓度(H)组.正常对照组用DMEM低糖培养基常规培养;H瓜组加入预先
【机 构】
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天津医科大学药理教研室 天津市中心妇产科医院药剂科
【出 处】
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全国第四次麻醉药理学学术会议暨2013年贵州省麻醉学术年会
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目的:研究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分组:将培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为5组,即(1)正常对照(Con)组;(2)缺氧/复氧(H/R)组;(3)S1P低浓度(L)组;(4)S1P中浓度(M)组;(5)S1P高浓度(H)组.正常对照组用DMEM低糖培养基常规培养;H瓜组加入预先经95％ N2+5％ CO2的混合气饱和的缺氧液,然后放入通有95％ N2+5％ CO2的37℃培养箱缺氧培养16h,16h后换用预先用95％空气+5％ CO2饱和的含药DMEM低糖培养基在正常培养条件下培养4 h;其余各组则在复氧前加入相应浓度的S1P复氧4h,终浓度分别为2μmol·L-1,4μmol·L-1,6μmol·L-1.用MTT法测定各组心肌细胞的存活率;收集各组细胞培养液测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Annexin V-FITC/PI双标法检测各组心肌细胞凋亡百分率;用Fura2-AM标记细胞内游离钙离子,荧光显微镜检测荧光强度以反映细胞内游离钙离子浓度的变化;Western Blot法测定各组保护性蛋白热休克蛋白70(HSP70)的表达情况.结果:(1)心肌细胞经缺氧复氧损伤后,细胞的存活率明显降低,凋亡率显著增加;加入不同浓度S1P干预后,存活率有明显升高,凋亡率有所下降ζ损伤明显减轻,其中S1P M组及H组与H/R组比较,具有统计学差异.(2)心肌细胞经缺氧复氧损伤后,MDA含量升高、SOD活性降低;与H/R组相比,S1P各个浓度组可降低MDA含量,并升高SOD活性升高,且L组与H组比较有统计学差异,M组与H组比较无统计学差异.(3)western blot结果显示,正常组有一定量的HSP70蛋白表达,缺氧复氧损伤使HSP70蛋白表达有所升高;加入不同浓度S1P干预后,HSP70蛋白表达明显增强,并呈一定的剂量依赖性.(4)正常组的细胞荧光强度维持在62.04+1.61水平;当缺氧复氧损伤后,细胞荧光强度明显增高.加入S1P干预后,不同药物浓度组的细胞荧光强度均有所降低,且S1PH组与H/R组比较有显著性差异.结论:S1P可以减轻心肌细胞氧化应激损伤,改善心肌细胞活力并减少凋亡.S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过减少Ca2+超负荷,增加抗凋亡蛋白HSP70表达来实现的.
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