高效液相色谱同时测定血清十二种生物胺方法的建立

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目的建立一种能同时测定血清腐胺、精胺、亚精胺、尸胺、组胺、色胺、2-苯乙胺、酪胺、章胺、5-羟色胺(5- HT)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)等十二种生物胺的反相高效液相色谱-紫外检测的方法。方法采用高氯酸沉淀血清样本,丹酰氯柱前衍生化,梯度洗脱,流动相:A,0.1mol/ LNH4Ac;流动相:B,乙氰,C-18色谱柱150×4.6mm,柱温40℃.流速1.0ml/min.检测波长254nm。结果血清十二种生物胺能有效地分离。方法的检测限依次为:色胺0.217μg/L,2-苯乙胺0.1551μg/L.腐胺0.628μg/L,尸胺0.0764μg/L,组胺0.0621μg/L,章鱼胺0.129μg/L,5-羟色胺0.380μg/L,酪胺0.135μg/L,精脒0.162μg/L,去甲肾上腺素0.0773μg/L,多巴胺0.141μg/L,精胺0.326μg/L。相关系数γ均接近或大于0.9999,线性范围分别为:色胺和腐胺0.01~10mg/L,2-苯乙胺和去甲肾上腺素0.005~20mg/L.尸胺、5-羟色胺和酪胺0.005~5mg/L.组胺和章鱼胺0.001~5mg/L,精脒0.001~20mg/L,精胺0.01~5mg/L.多巴胺0.005~1mg/L。精密度试验.批内CV范围为0.53%~7.50%.批间CV范围为1.10%~7.11%;平均回收率在92.02%~107.65%之间。对48例健康人血清生物胺测定结果显示,女性色胺、酪胺及组胺浓度显著低于同年龄男性.有统计学意义.其余9种血清生物胺浓度无性别差异。结论所建方法灵敏、方便、可靠。有利于多种疾病的同时诊断及疗效跟踪或一种疾病的多指标观察。可应用于临床及科研。
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