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目的 本课题组前期研究已证实UL148基因存在mRNA的表达,通过对UL148基因的表达时相的研究,初步鉴定得知UL148基因为人巨细胞病毒(HCMV)的晚期基因,可能编码人巨细胞病毒(HCMV)的结构蛋白,并对其所编码的蛋白质做了初步预测,大量的前期研究为UL148基因的蛋白质表达研究提供了基础,本研究将进一步研究UL148 mRNA的翻译情况,获得UL148基因的蛋白质,验证前期研究对其蛋白质预测的准确性,进一步探讨其在致病机制中的可能功能,为UL148蛋白功能的研究建立基础.方法 培养人包皮成纤维细胞(HFF)；用人巨细胞病毒(HCMV)感染生长状态良好的人包皮成纤维细胞(HFF)；提取感染人巨细胞病毒(HCMV)的人包皮成纤维细胞(HFF)的总RNA；将提取的总RNA行逆转录PCR,以得到的cDNA为模板PCR获取目的基因UL148全长；再将目的基因UL148全长与表达载体pET32a酶切后连接,构建重组UL148蛋白表达质粒；并将其转化至感受态大肠杆菌DH5α；筛选阳性克隆；并挑取阳性克隆抽提质粒双酶切及测序鉴定；最后诱导阳性克隆大肠杆菌表达融合蛋白.结果 HCMV感染后出现细胞病变效应,证实人巨细胞病毒(HCMV)感染人包皮成纤维细胞(HFF)成功,并从人巨细胞病毒(HCMv)感染的人包皮成纤维细胞(HFF)中抽提出总RNA,进行1.5％琼脂糖凝胶电泳观察总RNA质量,电泳结果RNA得28S、18S和5.8S条带清晰可见,RNA完整性好,可作为逆转录模版,以逆转录PCR合成的cDNA为模板,PCR获得UL148基因全长.UL148基因与pET32a载体酶切后连接,成功构建重组UL148蛋白表达质粒,并将其成功转化至感受态大肠杆菌DH5 α,获得阳性克隆,抽提重组质粒双酶切及测序鉴定成功,成功诱导表达UL148蛋白.结论 本课题表达出了UL148蛋白,证实了之前的推测,说明UL148基因既能转录出mRNA,也能翻译蛋白质,很可能是结构基因.其表达的蛋白质性质稳定,能被分离纯化出来,这为制备UL148蛋白抗体提供了前提条件,也为进一步研究UL148基因的蛋白质功能奠定了基础,同时开阔了人巨细胞病毒疫苗研究的方向.