MYB89转录因子抑制种子油脂积累的机制解析及其在油菜中的应用

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植物种子油脂不仅是人类营养物质的主要来源,而且是种子萌发和幼苗形态建成必不可少的能量物质,还被广泛用作工业原料和生物燃料等。因此,研究种子油脂积累的分子机制及其调控网络具有重要的理论和现实意义。转录调控在种子油脂积累过程中发挥至关重要的作用,日益受到科学家的关注。MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族成员之一,参与了细胞分化、细胞周期、次级代谢产物代谢等生物学过程。然而,该家族成员对种子油脂积累影响的报道尚少。我们发现,AtMYB89为转录因子定位于细胞核内,该基因在各个营养器官和发育的种子中均有表达,尤其在开花后第10到第16天的种子中的表达量最高。采用气相色谱分析种子脂肪酸组分含量,结果表明,该基因突变体myb89-1在种子不同发育时期各主要脂肪酸组分含量均显著高于野生型,且AtMYB89 RNAi干扰株系的成熟种子主要脂肪酸组分含量与myb89-1表型一致,均显著高于野生型。此外,在myb81基础上过表达该基因能够完全恢复该突变体种子高脂肪酸含量的表型。这些结果表明AtMYB89负向调控种子油脂积累。利用开花后12天的发育种子开展RNA-seq实验,结果显示,参与油脂积累的一系列基因均被显著上调,其中包括两个重要的转录因子WRI1和L1L。采用荧光定量PCR技术进一步比较分析myb89-1突变体中被显著影响的一系列基因的表达差异,结果与RNA-seq结果一致。利用糖皮质激素诱导系统(GR诱导系统)和染色质免疫共沉淀(ChIP-qPCR)技术证实,AtMYB89通过直接作用于WRI1、ENO1、BCCP、KAS1、KCS11和PLA2α等基因的启动子区域而直接抑制这些基因的表达。另一方面,甘蓝型油菜基因组中BnMYB89仅有一个拷贝,亚细胞定位研究表明其定位于细胞核中。在myb89-1突变体中过表达BnMYB89能够完全恢复其种子中的脂肪酸含量,这暗示在种子油脂积累过程中BnMYB89与AtMYB89功能保守,均具有负向调控种子油脂积累的功能。目前,我们已通过油菜遗传转化技术获得了BnMYB89的过表达、CRISPR/Cas9和RNAi等的转化株系,正在深入解析其在油菜种子油脂积累中的作用机制及其调控网络,为增加油菜产油量、改善菜籽油品质提供基因原件和种质资源。
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