粉红螺旋聚孢霉67-1二氢吡啶二羧酸合成酶基因的功能研究

被引量 : 0次 | 上传用户:my_sunday_tongxing
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea,异名:粉红粘帚霉,Gliocladium roseum)是一类重要的菌寄生菌,可以防治多种植物病原真菌。该菌产生的厚垣孢子在土壤中易于存活和繁殖,使其生防效果更加稳定高效。为研究粉红螺旋聚孢霉产厚垣孢子相关基因,前期研究对高效菌株67-1厚垣孢子形成过程的转录组进行了测序分析,获得了一个显著差异表达的二氢吡啶二羧酸合成酶基因Cch47820,实时荧光PCR监测表明,Cch47820在厚垣孢子形成过程的不同阶段(36h,72h)均显著下调表达。通过67-1全基因组序列克隆获得Cch47820基因全长,结果显示:该基因总长927bp,不含内含子。生物信息学分析表明,Cch47820蛋白分子量为33 717.89u,等电点为7.17。可以编码由308个氨基酸组成的多肽,为亲水性蛋白,无信号肽和跨膜区。为研究Cch47820在粉红螺旋聚孢霉厚垣孢子形成过程中的功能与作用,本研究成功构建Cch47820基因敲除载体。采用PEG-CaCl2转化方法,将Cch47820敲除载体转入67-1原生质体中,经潮霉素抗性标记筛选、单菌落培养和PCR验证,获得1株稳定遗传的突变菌株。对突变菌株进行形态学测定,结果显示:在PDA培养基上,突变菌株生长速率为5.52mm/d,显著低于67-1野生菌株5.96mm/d(P<0.05);生长1周后,突变株菌落颜色为淡黄色,野生菌株呈浅绿色。在厚垣孢子培养基中培养72h后,突变菌株产孢量为(2.17±0.25)×106孢子/ml,显著低于野生菌株产孢量((7.0±0.17)×106孢子/m1),Cch47820敲除后产厚垣孢子能力显著降低。生测实验表明突变菌株对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的竞争能力较野生菌株显著下降,对大豆核盘菌(Sclerotina sclerotiorum)菌核的寄生能力增强。表明二氢吡啶二羧酸合成酶基因参与到粉红螺旋聚孢67-1的产孢和生防过程。本研究为揭示粉红螺旋聚孢霉厚垣孢子形成与调控机制奠定了理论基础。
其他文献
近十年来,我国农产品期货市场发展迅猛,上市品种不断增加,交易量屡创新高。快速发展的农产品期货市场为我国农产品现货市场提供了良好的风险管理平台,越来越多的农业生产者、
目的:检测原发性高血压(EH)伴颈动脉粥样硬化患者外周血Th17细胞比例的变化及与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平的相关性。方法:行颈动脉超声检查选择20例EH伴颈动脉粥样硬化患者(CA
为进一步完善我国《公司法》第149条规定的“禁止篡夺公司机会”规则,本文从保护公司机会的法理基础入手,通过比较两大法系对公司机会保护的不同方式,吸收借鉴了英美法系有关公
通过VBA对AutoCAD的二次开发,设计了一个可以选择多个图形文件,并同时进行批量文字查找和替换的应用程序。比较之前通过命令行对话框的操作,解决了一次只能选择一个图形文件的问题,提高了工作效率,实际应用效果良好。
钛合金具有密度小、比强度高、比刚度高等特点,是工程轻量化设计的理想材料。内置流道钛合金结构可在材料轻量化的基础上进一步减小自重、降低能耗,但传统工艺加工内置流道钛