【摘 要】
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目的:本研究的目的是探讨nm23-H1基因调控Rho/ROCK/MLC信号通路及肺癌细胞骨架和侵袭转移的作用及其分子机制。方法:应用siRNA短双链导入NL9980细胞株，成功构建瞬时转染阴性对
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目的:本研究的目的是探讨nm23-H1基因调控Rho/ROCK/MLC信号通路及肺癌细胞骨架和侵袭转移的作用及其分子机制。方法:应用siRNA短双链导入NL9980细胞株，成功构建瞬时转染阴性对照siRNANL9980细胞株和nm23-H1-siRNA NL9980细胞株;应用Western Blot验证nm23-H1基因沉默后Rho/ROCK信号通路相关基因的蛋白表达水平变化;应用激光共聚焦检测nm23-H1基因沉默对细胞微丝骨架的影响，并应用Rho和ROCK抑制剂处理后观察其变化;应用Vi-Cell细胞仪直接计数检测NL9980组、Exoenzyme C3和Y27632处理细胞的生长曲线。结果:本研究成功将siRNA段双链导入NL9980细胞株，成功构建阴性对照siRNANL9980细胞株(NL9980-siRNA)和nm23-H1-siRNA(NL9980-nm23-H1-siRNA);Rho/ROCK/MLC信号通路相关基因中，RhoC, ROCK II基因表达上调，而RhoA, ROCK I和MRLC2基因无明显变化;Nm23-Hl基因沉默组NL9980肺癌细胞株较阴性对照转染组NL9980细胞株有较多细胞通过基质胶(ECM)的滤膜;经Rho抑制剂ExoenzymeC3和ROCK抑制剂Y-27632处理后，NL9980肺癌细胞株细胞通过基质胶(ECM)的滤膜的数量明显减少;NL9980组和加入Exoenzyme C3和Y27632处理的三组细胞生长曲线基本一致，未见Exoenzyme C3和Y27632对细胞增殖有明显影响。结论: nm23-H1基因可调控人大细胞肺癌细胞株NL9980细胞骨架相关基因mRNA和蛋白表达水平;nm23-Hl基因可明显抑制Rho/ROCK/MLC信号通路mRNA和蛋白表达水平; Nm23-Hl沉默可上调人大细胞肺癌细胞株NL9980细胞骨架和Rho/ROCK/MLC信号通路相关基因mRNA和蛋白表达水平，增加肺癌细胞微丝骨架、张力纤维，以及体外侵袭能力;nm23-H1基因对Rho/ROCK信号通路的调节可能是其抑制肺癌侵袭转移的重要分子机理。
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