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目的:现阶段,研究者大多致力于淡豆豉(Semen Sojae praeparatum)中异黄酮成分及其药用价值的研究,而不同来源、不同批次药材因生产工艺、贮存条件不同所引起的成分含量及药效差异,并未得到关注.本研究旨在通过对安徽、江苏、河南三个产区的共8个批次淡豆豉药材的检测,以发现差异化合物的相对含量为指标,建立快速简便鉴别淡豆豉药材产地差异性的方法,为淡豆豉药材的质量评价提供新依据.
方法:将淡豆豉药材粉碎，过80目筛;精密称取各批次药材粉末0.9g，各加入3mL甲醇，超声提取30min,2500r/min离心10min，取上清液，重复上次操作两次，将上清液合并并用微孔滤膜(0.45μm)滤过，定容至10mL作为供试品溶液，每一批材料平行准备三份。使用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)，以0.5％甲酸水溶液(A)和0.5%甲酸甲醇溶液(B)为流动相梯度洗脱(0-3.5min,95%A;3.5-4min,95-40%A;4-12min 40-20%A;12-18min,20-10%A;18-18.1min,10-95%A;18.1-21min,95%A)，流速为0.3mL/min，柱温为40` C;在正离了(ESI+)和负离了(ESI-)模式下进行检测，质谱检测数据采集范围m/z:100-1500Da，使用数据相关采集(IDA)技术，开启动态背景扣除(DynamicBackground Subtraction On，气帘气(Curtain Gas)为45 psi,Gasl为55 psi,Gas2为55 psi,温度(TEM)为5500C，喷雾电压(ionspray pressure)为5500V(正离了模式)或-4500V(负离了模式),解簇电压(DP)为80V(正离了模式)或-80V(负离了模式)。利用AB Sciex公司Markerview软件对结果进行PCA-DA聚类分析及t检验并结合6种大豆异黄酮及9种酚酸标准品标准品，依据从AB Sciex公司Peakview软件中获得的二级裂解质谱图及推断信息对特异性标记物进行鉴定分析。
结果:由图1可见，各组分分离度良好、峰形对称，正离了模式下得到的色谱峰较多，且信号强度较大，相同模式下，各批次淡豆豉药材的图谱也存在差异;从聚类分析得分图(图2)可看出本实验所建立的PCA模型聚类良好，不同产区的淡豆豉药材经分析后在正负两种模式下都可以很好地被区分开，而来源于相同产区不同批次的药材均相近聚类;结合聚类分析载荷图差异点筛选，最终在两种模式下各得到对分类贡献较大的23种差异化合物，在正离了模式下成功鉴定出香草酸、咖啡酸、丁香酸、大豆普元、黄豆黄素、染料木素共6种差异化合物，在负离了模式下成功鉴定出没食了酸、儿茶酸、咖啡酸、丁香酸、绿原酸、原儿茶酸、阿魏酸、肉桂酸、水杨酸、大豆普元、黄豆黄素、染料木素共12种差异化合物，证明负离了模式更适合于淡豆豉中异黄酮及酚酸的定性定量检测;从差异化合物相对含量分析可知，一些物质共存于3个产地淡豆豉药材中仅相对含量不同，而有些只存在于某一产地而其他产地中含量非常低甚至观察不到:在正离了模式下，香草酸和未知化合物(m/z=322.2343,395.2729,347.2519,293.2447)仅存在于河南产淡豆豉中，未知化合物(m/z=814.5754,279.2312,518.3219)仅存在于江苏产淡豆豉中，未知化合物(m/z=284.0990儿乎只存在于安徽产淡豆豉中，而存在于河南产淡豆豉中的丁香酸和未知化合物(m/z=351.2470)含量远高于江苏产;在负离了模式下，河南产淡豆豉中大豆普元的含量高于江苏产高于安徽产，安徽产淡豆豉中咖啡酸的含量高于江苏产高于河南产，未知化合物(m/z=311.2210,593.2698,595.2871)儿乎只存在于安徽产淡豆豉中，而没食了酸、黄豆黄素、染料木素和未知化合物(m/z=153.0199,476.2771)在江苏产淡豆豉中含量最高，研究认为在负离了模式下载荷图中离群较远的大豆普元和染料木素暂时可作为不同产地淡豆豉药材的已知差异标志物。
结论:本研究基于UFLC/TripleTOF-MS技术，建立了快速、简便、准确鉴别淡豆豉药材产地差异性的方法，作为发展淡豆豉药材地道性及控制其质量稳定的一种参考手段，在一定程度上弥补了现阶段对淡豆豉药材产地研究的空白。鉴于不同产地淡豆豉的显著差异，要深入研究药材的内在品质及药效差异，还有待后续对原料、采收时问、辅料及发酵工艺等条件的考察，以及对未知差异化合物的结构鉴定。