【摘 要】
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目的:体外实验研究PM2.5的肺上皮细胞毒性作用,并探讨线粒体动力学在其中的调控作用机制。方法:首先对细颗粒物进行表征,采用透射电子显微镜（transmissionelectron microscope,TEM）观察PM2.5颗粒粒径、形貌及分散性,动态光散射法检测颗粒水合粒径及电位;然后以体外培养的人肺上皮细胞（Beas-2B）为模型,MTT法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞内ROS、线粒体RO
【机 构】
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2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集
【出 处】
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2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集
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目的:体外实验研究PM2.5的肺上皮细胞毒性作用,并探讨线粒体动力学在其中的调控作用机制。方法:首先对细颗粒物进行表征,采用透射电子显微镜（transmissionelectron microscope,TEM）观察PM2.5颗粒粒径、形貌及分散性,动态光散射法检测颗粒水合粒径及电位;然后以体外培养的人肺上皮细胞（Beas-2B）为模型,MTT法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞内ROS、线粒体ROS、细胞内Ca2+水平以及细胞凋亡;共聚焦显微镜检测线粒体膜电位;透射电镜观察线粒体超微结构;Mitotracker标记后,共聚焦显微镜实时观察线粒体形态;WesternBlot检测线粒体动力学和细胞凋亡调控分子表达;免疫荧光法检测DRPs616表达及其在线粒体共定位情况;Seahorse检测线粒体能量代谢。结果:TEM可见PM2.5颗粒形态多样,大小不一,分散较好,粒径在2.5μm左右且以1μm以内颗粒为主。PM2.5作用24小时可引发Beas-2B细胞损伤,出现细胞内氧化应激、钙超载,诱导线粒体膜电位降低、线粒体数量、结构和功能紊乱以及干扰线粒体动力学,促进线粒体分裂,最终导致细胞凋亡。机制研究发现,线粒体分裂抑制剂Mdivi-1可有效抑制PM2.5的促线粒体分裂作用,减少DRPs616表达及其易位到线粒体,并减轻PM2.5所致细胞凋亡的发生。结论:线粒体是大气细颗粒物PM2.5的重要靶细胞器。PM2.5可引发线粒体毒性,造成线粒体数量、形态、结构和功能紊乱,引发细胞凋亡。而且,线粒体动力学失衡调控PM2.5的肺上皮细胞毒性作用。
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