【摘 要】
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通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒完整的HA基因并进行了克隆与序列分析.扩增的HA基因开放性阅读框架由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸.HA蛋白裂解位点的氨基
【机 构】
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南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室(江苏南京)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会
论文部分内容阅读
通过RT-PCR反应扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒完整的HA基因并进行了克隆与序列分析.扩增的HA基因开放性阅读框架由1707个核苷酸组成,共编码568个氨基酸.HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF,含连续的碱性氨基酸,具有高致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征.进一步构建了真核表达载体pcDNA-HA,通过与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的293T细胞,收集假病毒上清,通过Western-blot证明HA蛋白能够整合到假病毒颗粒表面,通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后均能检测到Lac Z基因的表达,证实所构建的假病毒具有泛嗜性,能够进入细胞.成功构建了具有感染性的MuLV-HA假病毒体系,为研究鹅源禽流感病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法.
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